ستون متالوکروماتوگرافی NI-IDA

ستون متالوکروماتوگرافی NI-IDA پارس توس

معرفی محصول:

ستون متالوکروماتوگرافی Ni-IDA Column محصولی با کیفیت بالا از شرکت پارس توس است که برای خالص‌سازی سریع و کارآمد پروتئین‌های نوترکیب دارای برچسب پلی‌هیستیدین (His-tag) طراحی و تولید شده است. این ستون از روش کروماتوگرافی میل ترکیبی یون فلز (IMAC) استفاده می‌کند، روشی قدرتمند و قابل اعتماد که امکان جداسازی پروتئین‌های هدف را با خلوص بالا و در یک مرحله فراهم می‌آورد.

فناوری Ni‑IDA:

فناوری Ni‑IDA بر پایه کروماتوگرافی تمایلی با فلزات (IMAC: Immobilized Metal Affinity Chromatography) عمل می‌کند. در این روش، گروه شیمیایی ایمینو دی‌استیک اسید (IDA) به عنوان لیگاند عمل کرده و به‌صورت کووالانسی روی یک بستر جامد (مثلاً رزین آگاروز) تثبیت می‌شود. سپس یون‌های فلزی دوبار مثبت مانند نیکل (Ni²⁺) به گروه‌های IDA متصل می‌شوند.

هیستیدین‌ها در برچسب His-tag پروتئین‌ها، به دلیل وجود حلقه ایمیدازول در ساختارشان، تمایل بالایی برای اتصال به یون‌های فلزی واسطه نظیر نیکل دارند. هنگامی که محلول پروتئینی از ستون Ni‑IDA عبور داده می‌شود، این برهم‌کنش بین حلقه ایمیدازول هیستیدین و یون نیکل باعث به دام افتادن پروتئین هدف روی رزین می‌گردد، در حالی که پروتئین‌های فاقد His-tag عبور می‌کنند.

قدرت اتصال را می‌توان با تغییر شرایط شیمیایی محیط شستشو تنظیم کرد. برای جداسازی پروتئین هدف، معمولاً از غلظت‌های کنترل‌شده ایمیدازول استفاده می‌شود که با رقابت برای جایگاه‌های اتصال، پروتئین هدف را آزاد می‌کند. کاهش pH یا استفاده از عوامل شلاته‌کننده مانند EDTA نیز می‌تواند همین اثر را داشته باشد.

یکی از مزایای IDA نسبت به لیگاندهای مشابه (مانند NTA) انعطاف بیشتر در شرایط دناتوره و غیردناتوره است، هرچند که اختصاصیت آن اندکی کمتر از NTA در حضور پروتئین‌های بسیار مشابه می‌باشد.

کاربرد و مکانیزم عملکرد Ni-IDA Column:

Ni-IDA Column برای تخلیص پروتئین‌هایی که دارای توالی شش باقی‌مانده هیستیدین متوالی یا بیشتر (His-tag) هستند، استفاده می‌شود.

این برچسب معمولاً ۶ عدد هیستیدین پشت سر هم (HHHHHH) است، ولی می‌تواند بیشتر هم باشد (مثلاً His₈ یا His₁₀). در این فناوری، یون‌های نیکل دوظرفیتی (Ni²⁺) با استفاده از گروه‌های ایمینو دی‌استیک اسید (IDA) روی یک بستر جامد تثبیت شده و قادر به ایجاد پیوند اختصاصی با برچسب هیستیدینی پروتئین‌ها هستند.

هنگامی که نمونه حاوی پروتئین نوترکیب از ستون عبور می‌کند، پروتئین‌های هدف به یون نیکل متصل شده و ناخالصی‌ها از ستون عبور می‌کنند. سپس با تغییر شرایط شستشو، معمولاً با افزودن ایمیدازول یا کاهش pH، پروتئین هدف جدا و به صورت خالص جمع‌آوری می‌شود.

Ni-IDA Column هم تحت شرایط غیر دناتوره (Native) و هم تحت شرایط دناتوره‌کننده (Denaturing) قابل استفاده است و انعطاف بالایی در کاربردهای آزمایشگاهی دارد.

ویژگی‌ها و مزایای محصول Ni-IDA Column پارس توس:

1. کاربرپسند و سریع – امکان خالص‌سازی سریع پروتئین‌ها در یک مرحله، کاهش زمان و هزینه فرآیند.
2. سازگاری بالا – قابل استفاده برای پروتئین‌های بیان‌شده در انواع سیستم‌های بیانی مانند E. coli، پستانداران، مخمر و حشرات.
3. امکان استفاده مجدد – این ستون بیش از ۱۰ بار بدون کاهش کارایی قابل استفاده است. با شارژ مجدد نیکل، حتی تا ۸ بار دیگر نیز قابل استفاده می‌باشد.
4. ظرفیت بالا – ظرفیت اتصال بالا برای پروتئین‌های با برچسب His در حجم پایین نمونه.
5. پایداری و ماندگاری طولانی – Resin Ni-IDA به صورت سوسپانسیون در اتانول ۲۰٪ عرضه شده و تا 24 ماه در شرایط مناسب پایدار است.
6. حفظ کیفیت تحت شرایط مختلف – مقاوم به گستره وسیعی از شرایط بافری و دمایی، به شرط عدم حضور عوامل احیاکننده قوی.

شرایط نگهداری و پایداری:

• دمای نگهداری ستون Ni-IDA Column: ۴ درجه سانتی‌گراد (برای کیت کامل)
• پایداری رزین Ni-IDA: در اتانول ۲۰٪ پایدار در دمای اتاق
• ماندگاری معرف‌ها: تا ۲۴ ماه در شرایط نگهداری توصیه شده
• نکته مهم: از یخ‌زدگی Ni-IDA Column خودداری شود.

نکات فنی و توصیه‌های کاربردی:

• قبل از شروع فرآیند تخلیص، اطمینان حاصل کنید که بافر پروتئینی فاقد ترکیبات احیاکننده (مانند DTT یا β-Mercaptoethanol) باشد، زیرا این مواد باعث آزاد شدن یون نیکل و کاهش کارایی ستون می‌شوند.
• برای خالص‌سازی یک نوع پروتئین خاص، با محصول Ni-IDA Column پارس توس، خالص‌سازی پروتئین‌ها را با سرعت، دقت و کیفیت بالا تجربه کنید. می‌تواند تا دو بار بدون شارژ مجدد نیکل استفاده شود.
• در صورتی که قصد تخلیص پروتئین متفاوتی دارید، حتماً ستون را Regeneration و Recharge کنید تا بقایای پروتئینی از بارگذاری قبلی حذف شود.
• با رعایت اصول نگهداری و شستشو، Ni-IDA Column تا حداقل ۸ بار شارژ مجدد بدون افت عملکرد قابل استفاده است.

بسته‌بندی و عرضه محصول:

ستون‌های Ni-IDA Column شرکت پارس توس در حجم استاندارد ۵ میلی‌لیتر عرضه می‌شوند. بسته‌بندی‌ها در دو مدل مختلف ارائه می‌شود:

• بسته‌های تک عددی Ni-IDA Column برای مصارف کم
• بسته‌های پنج عددی Ni-IDA Column برای مصرف‌کنندگان پرمصرف با قیمت مناسب‌تر

کاربردهای تحقیقاتی Ni-IDA Column:

Ni-IDA Column محصولی ایده‌آل برای کاربردهای گسترده تحقیقاتی در حوزه‌هایی چون:

• بیوتکنولوژی و مهندسی پروتئین
• مطالعات ساختاری و عملکردی پروتئین‌ها
• تولید پروتئین‌های نوترکیب برای واکسن یا داروهای پروتئینی
• آزمایش‌های تخلیص پیش از بلورنگاری (X-ray Crystallography) یا NMR

چرا Ni-IDA Column پارس توس انتخابی هوشمندانه است؟

شرکت پارس توس با بهره‌گیری از دانش فنی و تجربه چندین ساله در تولید محصولات بیولوژی مولکولی، ستون Ni-IDA Column را با استانداردهای کیفی بالا و قیمت رقابتی عرضه می‌کند. این محصول با ویژگی‌های فنی ممتاز، توانایی رقابت با نمونه‌های خارجی را دارد و پشتیبانی فنی متخصصان پارس توس موجب اطمینان خاطر کاربران می‌شود.

ویژگیهای Ni-IDA Column:

• خالص سازی در شرایط غیر دناتوراسیون
• خالص سازی در شرایط دناتوراسیون
• عملکرد بالا و خاص
• بسیار مقرون به صرفه

اجزای Ni-IDA Column:

• Ni-IDA Resin
• Column & head and bottom plugs
• Filter (polypropylene frit)

فایل های مرتبط با Ni-IDA Column: